一、非洲豬瘟變異株的定義

非洲豬瘟變異株包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等，與2018年傳入的非洲豬瘟毒株相比，該類(lèi)毒株的基因組序列、致病力等發(fā)生明顯變化。生豬感染該類(lèi)毒株后，潛伏期延長(cháng)，臨床表現輕微，后期可出現關(guān)節腫脹、皮膚出血型壞死灶，感染母豬產(chǎn)仔性能下降、死淘率增高，出現流產(chǎn)死胎/木乃伊胎等。與傳統的流行毒株相比，生豬感染該類(lèi)毒株后排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發(fā)現。

二、監測方法

（一）加強臨床巡視

時(shí)刻關(guān)注豬場(chǎng)各個(gè)環(huán)節豬只異常情況，想方設法提升飼養人員責任心，一旦發(fā)現豬只出現嗜睡、輕觸不起、采食量減少，發(fā)熱、皮膚發(fā)紅、關(guān)節腫脹/壞死、咳喘、腹式呼吸，育肥豬死淘率增高，母豬流產(chǎn)或出現死胎/木乃伊胎等可疑臨床表現時(shí)，應第一時(shí)間采樣檢測。

（二）改進(jìn)主動(dòng)監測

每周對豬群進(jìn)行病原和抗體檢測。在豬群進(jìn)行疫苗接種、轉群、去勢，或母豬分娩后，應進(jìn)行采樣檢測。豬場(chǎng)出現風(fēng)險暴露或周邊豬場(chǎng)出現感染時(shí)，按需進(jìn)行采樣檢測。

（三）抽樣策略

對可疑豬的同舍和關(guān)聯(lián)舍豬群，采集深部咽拭子和抗凝血，進(jìn)行病原檢測，必要時(shí)采集血清進(jìn)行抗體檢測。對可疑豬及臨近豬接觸的地面、欄桿，以及舍內人員接觸的物品等，采集環(huán)境樣品進(jìn)行病原檢測。病原檢測如果混檢，建議混樣數量不超過(guò)5個(gè)；抗體檢測不得混樣。

（四）樣品選擇

1. 對可疑豬，按檢出概率高低排序，依次采集深部咽拭子、前腔靜脈抗凝血（EDTA）或尾根血、口鼻拭子。

2. 對分娩母豬，應采集臍帶血、胎衣；對死胎和流產(chǎn)胎兒，應采集淋巴結、脾臟等組織樣品。

3. 對病死豬，優(yōu)選采集部位為淋巴結、脾臟、骨髓和肺臟。

4. 血清樣本，按常規方法制備。

三、檢測方法及配套

（一）采樣

豬場(chǎng)用戶(hù)在進(jìn)行環(huán)境樣監測或者群體普查時(shí)，可在采樣時(shí)使用快靈的軟拭子和多腔體病毒采樣管進(jìn)行高效采樣及混樣。

軟拭子頭部具有彈性，彈性絨毛拭子頭較容易彎曲來(lái)適應豬場(chǎng)不同的異性部位，增大采樣接觸面積，其面積比普通紡錘形拭子多2-3倍，能更多采集目標樣品。

多腔體采樣管不同于市面上傳統的采樣管，其內部結構分別為洗滌腔及擠存腔，洗滌腔體內設有多個(gè)豎向刮擦片，對進(jìn)入腔體中旋轉的拭子進(jìn)行接觸刮擦，幫助絨毛表面的樣品洗脫釋放。多個(gè)擠存錢(qián)腔可以最多十根軟拭子，釋放了樣本后將拭子插入洗滌腔上部的擠壓腔，可將彈性植絨拭子吸附的洗脫液擠壓出來(lái)并從縫隙部位回流到洗滌腔。相比傳統采樣管，僅用少于1/5容積的液體就能充分對拭子樣品進(jìn)行洗滌，能直接提高采樣溶液病原濃度達5-6倍。

（二）病原檢測方法

原則上參照“農辦牧〔2020〕39號”附件《非洲豬瘟病毒流行株與基因缺失株鑒別檢測規范》。

對采集的樣本進(jìn)行核酸提取，可選用快靈的手動(dòng)柱法提取試劑盒，樣本量太大可使用快靈磁珠提取試劑盒。

擴增時(shí)建議選用快靈ASFV流行株/基因缺失變異株鑒別試劑盒，即P72/MGF/CD2V鑒別試劑盒（下稱(chēng)鑒別試劑盒），為了適配不同客戶(hù)的不同儀器，快靈鑒別試劑盒在標準試劑盒的基礎上進(jìn)行部分優(yōu)化，僅涉及檢測項目，試劑盒靈敏度、特異性等基本功能保持一致，方便客戶(hù)根據不同的需求進(jìn)行選擇。不同試劑盒性能見(jiàn)表1：

表1：不同鑒別試劑盒性能說(shuō)明

（三）抗體檢測方法  采用間接ELISA、阻斷ELISA等方法檢測抗體水平，詳見(jiàn)《非洲豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 18648）

抗體檢測的意義對于急性疾病的爆發(fā)，病毒檢測（PCR）最有用，血清學(xué)診斷價(jià)值較低，因為感染的豬大多數在抗體產(chǎn)生之前死亡；非洲豬瘟變異株（包括基因缺失株、自然變異株、自然弱毒株等）的出現，生豬感染該類(lèi)毒株后，潛伏期延長(cháng)，臨床表現輕微，感染該類(lèi)毒株后排毒滴度低、間隙性排毒，難以早期發(fā)現，因此抗體檢測的作用凸顯。如果沒(méi)有接種過(guò)疫苗，抗體的存在表明感染過(guò)非洲豬瘟病毒。上?？祆`非洲豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（間接法）系用大腸桿菌表達的非洲豬瘟病毒P30蛋白包被酶標板，P30蛋白是病毒的主要結構蛋白，在感染的早期表達和分泌，可用于感染后免疫反應的的早期檢測。

ELISA抗體檢測原理 ELISA試劑盒是根據固相酶聯(lián)免疫吸附試驗設計而成的。在本檢測過(guò)程中，樣本暴露于包被在微量板孔內的非感染性非洲豬瘟抗原。非洲豬瘟抗體（如果檢測樣本中存在）則將與酶標板上抗原結合，經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長(cháng)測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有非洲豬瘟抗體。

上?？祆`非洲豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（間接法）使用便捷、快速、敏感性高、特異性強，是理想的非洲豬瘟病毒抗體測工具。